智啟醫(yī)學(xué)新維度
服務(wù)電話: 180-1784-7121(微信同號)
TA克隆
TA克隆方法(TA Cloning):把PCR片斷與一個具有3-T突出的載體DNA連接起來的方法。因為PCR反應(yīng)中所適用的聚合酶具有末端轉(zhuǎn)移的活性,通常在3加上A。例如:Taq聚合酶同時具有的末端連接酶的功能,PCR反應(yīng)時在每條PCR擴增產(chǎn)物的3端自動添加一個3-A突出端。只有用經(jīng)過特殊處理的具有3-T突出末端的DNA的片斷才能通過T/A配對進行連接。
通過PCR的方法擴增目的基因片斷的過程中,由于往往不清楚目的基因的DNA序列,獲得的目的片斷通常需要通過TA克隆的方法,重組到T-載體中,通過序列測定清楚DNA序列。由于在PCR過程中,使用的DNA聚合酶不同,往往分為2種情況:(1)使用不同的Taq酶,在PCR擴增循環(huán)結(jié)束后,加上72℃ 10分鐘一個過程,Taq酶可以在擴增產(chǎn)物的3末端加上A,因此PCR產(chǎn)物回收純化后可以和T載體直接連接。(2)使用高保真的DNA聚合酶,如pfu酶,由于其不能在擴增產(chǎn)物的3末端加上A,得到的DNA序列為鈍端,因此,需要在回收純化后進行加A的過程,通常是以PCR回收產(chǎn)物為模板,加上量的普通Taq酶和反應(yīng)液,加入dATP(或dNTP),72℃10分鐘,然后將加A產(chǎn)物直接用于TA連接。
TA克隆實驗材料要求:未純化的PCR產(chǎn)物及PCR電泳圖片,PCR擴增引物序列PCR擴增用酶,如果使用含3'→5'外切酶活性的聚合酶,請?zhí)峁㏄CR引物,我們將重新擴增PCR產(chǎn)物以能進行TA克隆操作。
TA克隆服務(wù)說明
1、PCR產(chǎn)物TA克隆實驗中,PCR片段越大,TA克隆難度越大;2、TA克隆實驗中,我們使用的是大家常用 T載體作為標準T載體,如果對載體有特殊要求,請再實驗之前告知客戶服務(wù)人員。
如果您對我們的TA克隆感興趣或有疑問,你可以通過網(wǎng)頁咨詢我們的在線客服,或致電:18017844061,我們將熱情為您服務(wù)。