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產(chǎn)品詳情

  • 產(chǎn)品名稱：細胞體外培養(yǎng)

  • 產(chǎn)品型號：
  • 產(chǎn)品廠商：其它品牌
  • 產(chǎn)品文檔：
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簡單介紹：
細胞體外培養(yǎng):目的探索大鼠骨髓來源的血管內(nèi)皮祖細胞(EPCs)的體外培養(yǎng)、誘導(dǎo)分化及鑒定方法。方法采用密度梯度離心法從Wistar大鼠骨髓中分離出骨髓單個核細胞,并在誘導(dǎo)培養(yǎng)基(EGM-2MV)中培養(yǎng),貼壁篩選法分離,誘導(dǎo)分化為EPCs;觀察EPCs的生長分化過程,對其形態(tài)、表型、功能加以鑒定。
詳情介紹：

大鼠骨髓來源的內(nèi)皮祖細胞體外培養(yǎng)方法

  1. SD大鼠，250g，通過頸椎脫位處死大鼠，浸入75%乙醇浸泡5分鐘，轉(zhuǎn)移到通風(fēng)柜中的解剖盤中。

  2. 打開皮膚，暴露、收集股骨，無菌狀態(tài)下移除附著的肌肉和組織。

  3. 并轉(zhuǎn)移股骨至預(yù)冷含雙抗的PBS中，洗滌三次。冰上操作。

  4. 切斷股骨骨骺， 使用5mlPBS，1ml注射器針頭沖洗，沖洗液由棕色變成粉紅色即可（股骨變白）。沖洗后，用1ml注射器吹打3-5次。

  5. 70um濾網(wǎng)過濾，棄去篩網(wǎng)。使用 15ml 離心管，先加入分離液，然后緩慢加入濾過的懸液。20℃環(huán)境下，600g 離心 25min。

  6. 離心后，離心管中液體由上至下分為四層。第yi層為稀釋液層。第er層為環(huán)狀乳白色單個核細胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細胞層。

  7. 小心吸取離心管中的，環(huán)狀乳白色單個核細胞層，轉(zhuǎn)移到新離心管中，加入 5-10ml 洗滌液，混勻細胞。400g，離心 10min。

  8. 棄去上清，用吸管吸取 5ml 清洗液重懸所得細胞。 250g，離心 10min，棄去上清。 再用M199完quan培養(yǎng)基（含10 ng/mL VEGF，1 ng/mL b-FGF，1 ng/mL EGF，20%胎牛血清、1%雙抗）清洗一次，棄去上清，M199完quan培養(yǎng)基重懸細胞。250g，離心 10min，棄去上清。M199完quan培養(yǎng)基重懸細胞，計數(shù)。

  9. 按3×106/孔種入纖連蛋白包被過的24孔板，每3天換一次培養(yǎng)基，以去除非貼壁細胞，持續(xù)誘導(dǎo)培養(yǎng)2-3周。

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