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產(chǎn)品詳情
簡單介紹：
詳情介紹：
一、技術(shù)原理與分類
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?常規(guī)基因敲除（KO）?
- ?原理?：通過CRISPR-Cas9或ES細胞打靶技術(shù)完全刪除目標基因，導致其功能喪失。CRISPR-Cas9利用gRNA引導Cas9核酸酶切割DNA，通過NHEJ修復引入移碼突變實現(xiàn)敲除?。
- ?特點?：適用于研究基因的全身性功能，但可能導致胚胎致死或嚴重發(fā)育缺陷?。
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?條件性基因敲除（CKO）?
- ?原理?：基于Cre-loxP系統(tǒng)，將loxP位點插入目標基因兩側(cè)，通過與組織特異性Cre小鼠雜交實現(xiàn)時空特異性敲除?。
- ?優(yōu)勢?：避免全身性敲除的副作用，如研究心臟特異性敲除p53基因?qū)π募〔〉挠绊?。
二、構(gòu)建流程（以CRISPR-Cas9為例）
- ?設(shè)計編輯試劑?：優(yōu)化gRNA序列以減少脫靶效應，并通過細胞實驗驗證效率?。
- ?胚胎操作?：將Cas9/gRNA復合物顯微注射或電穿孔至小鼠受精卵，編輯后的胚胎移植至假孕母鼠?。
- ?基因型鑒定?：通過PCR或測序篩選攜帶突變的F0代小鼠，進一步繁育獲得純合子?。
- ?表型分析?：包括生理指標、組織病理學及行為學評估?。
三、應用場景
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?疾病機制研究?
- ?代謝疾病?：Leptin基因敲除小鼠模擬肥胖和糖尿病?。
- ?神經(jīng)退行性疾病?：Tau蛋白敲除小鼠研究阿爾茨海默病?。
- ?藥物開發(fā)?：用于靶點驗證和藥效評估，如PD-1敲除小鼠測試免疫療法?。
- ?基礎(chǔ)研究?：解析基因功能，如Hox基因家族對胚胎發(fā)育的影響?。
四、前沿進展與挑戰(zhàn)
- ?線粒體基因編輯?：新型堿基編輯器（如DdCBE）可構(gòu)建線粒體tRNA突變小鼠模型，模擬人類線粒體腎病?。
- ?倫理與優(yōu)化?：需遵循“3R原則”，并通過類器官模型（如axioloid）部分替代動物實驗?
