【操作步驟】惡性大鼠垂體腺瘤細(xì)胞株(mGH3)用F12完全培養(yǎng)基(F12培養(yǎng)基＋15％馬血清＋2.5％胎牛血清＋青霉素100U/ml＋鏈霉素100U/ml)，37℃，5％CO2維持。取對數(shù)生長期的mGH3細(xì)胞，經(jīng)消化，磷酸鹽緩沖液離心洗滌2次，制成細(xì)胞懸液。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為雌性Wistar-Furth大鼠，體重200～250g，按50mg/kg體重腹腔內(nèi)注射麻醉，固定于大鼠腦立體定向架，碘伏消毒，正中切開頭皮，剝離骨膜，鉆顱按坐標(biāo)靶向定位(冠狀縫后1mm，中線旁1.5mm，硬膜下4.5mm)，將肝素化的導(dǎo)管插入腦室，接種細(xì)胞量為1×1000000/ml，注射時(shí)間為10～15min，注射完畢繼續(xù)留針5min后緩慢退出，骨蠟封閉導(dǎo)管開口及骨窗，縫合頭皮。大鼠腦內(nèi)接種mGH3細(xì)胞后分籠飼養(yǎng)，觀察生長狀態(tài)，每隔1周隨機(jī)抽取3只大鼠，麻醉后心臟穿刺抽血，立即離心分離血清，－70℃保存，采用放射免疫分析(RIA)整批檢測大鼠生長**(rGH)。完整剝離腦組織，3mm層厚冠狀面切片，肉眼觀察腫瘤生長情況，再作病理切片，HE染色鏡下觀察。

【結(jié)果分析】大鼠腦室內(nèi)接種1×1000000個(gè)mGH3細(xì)胞，3周內(nèi)無明顯改變；3周后出現(xiàn)肢端肥大癥，包括軟組織水腫、四肢末端粗大、毛發(fā)增多、結(jié)膜水腫等改變；5周后大鼠出現(xiàn)厭食、消瘦、惡病質(zhì)改變；6周左右出現(xiàn)死亡，平均生存(44.2±5.6)d。第4周時(shí)可見腫瘤生長于一側(cè)腦室，已向第3腦室和周圍腦組織浸潤性生長。第6周時(shí)見腫瘤充滿腦室，并向周圍腦組織浸潤生長，中線移位，壓迫對側(cè)。死亡原因主要為占位效應(yīng)引起的顱內(nèi)高壓，但死亡時(shí)腫瘤體積較腦膠質(zhì)瘤小，可能循環(huán)中高生長**水平也是引起死亡的原因之一。病理切片鏡下見腫瘤細(xì)胞圓形，大小一致，核大，核染色質(zhì)凝聚，核仁明顯，核分裂像多見，5～8個(gè)/10HP，胞漿豐富，粉紅色；間質(zhì)內(nèi)血管豐富，有血竇；細(xì)胞具有垂體腺瘤的病理學(xué)特征，但異型性更明顯。監(jiān)測循環(huán)中生長**的水平，接種后1～2周，未見rGH水平明顯上升，從第3周起，rGH水平開始上升，以后上升趨勢加快，在死亡前rGH水平達(dá)到*高。

由于垂體腺瘤生理和解剖位置的特殊性，建立一種既符合臨床特點(diǎn)又達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求的垂體腺瘤模型比較困難，通過雌**可誘發(fā)垂體腺瘤，但有較大的隨機(jī)性，誘發(fā)瘤種類不一，性質(zhì)不穩(wěn)定。采用轉(zhuǎn)基因的方法可以建立穩(wěn)定的垂體腺瘤動(dòng)物模型。采用細(xì)胞移植的方法建立的大鼠惡性垂體腺瘤模型是一種較為理想的動(dòng)物模型。

來源：《常見人類疾病動(dòng)物模型的制備方法》 作者：秦川