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裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)技巧
裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)技巧
實(shí)驗(yàn)室常用的是BALB/c-nu裸小鼠 ,隨著裸小鼠年齡增長(zhǎng)或有關(guān)因素的影響(如病毒感染),裸鼠體內(nèi)正常T細(xì)胞會(huì)增加，故接種腫瘤實(shí)驗(yàn)一般采用4--6周齡的裸鼠。
裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)技巧
1、細(xì)胞的狀態(tài)是成瘤實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵，所以細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)一定要好，取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，細(xì)胞達(dá)80-90%左右密度為宜。收集細(xì)胞前**晚上更換新鮮培養(yǎng)基。
2、胰酶消化細(xì)胞后用預(yù)冷的PBS洗兩遍，目的為去除細(xì)胞中殘余的血清。
3、用PBS或者無(wú)血清培養(yǎng)基吹打細(xì)胞沉淀至合適的濃度，一般皮下瘤接種的細(xì)胞量為1-5×10^6個(gè)細(xì)胞/支，接種體積為0.1-0.2ml，因此細(xì)胞懸液的濃度為1-5×10^7個(gè)細(xì)胞/ml，如若有條件的實(shí)驗(yàn)室，也可以加基質(zhì)膠以加速瘤塊的生成，基質(zhì)膠與PBS或無(wú)血清的比列為1:1。
4、細(xì)胞消化后應(yīng)盡快接種到裸鼠皮下，一般盡量在半小時(shí)內(nèi)完成（如果接種量大，可以分批接種），途中將細(xì)胞懸液放在冰上降低細(xì)胞的代謝以保持細(xì)胞的活性。
5、選擇的裸鼠一般在4-6周齡，體重16-18g左右，種植部位選擇血供豐富區(qū)域，如腋窩中后部。
6、接種前用槍將細(xì)胞懸液充分的吹散，防止細(xì)胞成團(tuán)而降低細(xì)胞成活率，并且導(dǎo)致小鼠接種細(xì)胞數(shù)量的差異過(guò)大。
7、接種時(shí)，針頭在皮下進(jìn)針深一點(diǎn)，約1cm深，針頭在皮下左右滑動(dòng)幾次，以便細(xì)胞接種成團(tuán)，減少注射后細(xì)胞懸液從針眼溢出。
8、如何保定裸鼠?左手拇指和食指捏緊裸鼠頸背部皮膚，小拇指夾住裸鼠尾巴。
9、接種后1-2周左右可以見(jiàn)到皮下開(kāi)始出現(xiàn)腫塊。
10、根據(jù)腫瘤細(xì)胞的特性和接種細(xì)胞的量，一般皮下成瘤的周期為1-2個(gè)月。腫瘤不宜生長(zhǎng)過(guò)大，一般不要超過(guò)2000mm3。
11、腫瘤大小測(cè)量一般為1周兩次，游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤*長(zhǎng)和*短部位。V=1/2*a*b2 (a為長(zhǎng)軸，b為短軸)。
12、皮下瘤取下后一部分凍液氮用作以后提蛋白和RNA，一部分福爾馬林固定用做免疫組化、免疫熒光等。
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